pcr仪-荧光pcr仪-精塞玛(推荐商家)

2023-10-09 189浏览
摘要:<p>在PCR反应早期,产生荧光的水平不能与背景明显地区别,而后荧光的产生进入指数期、线性期和终的平台期,因此可以在PCR反应处于指数期的某一点上来检测PCR产物的量,并且由此来推断模板初的含量。为了便于对所检测样本进行比较,在real-timeQ-PCR反应的指数期,首先需设定一定荧光信号的域值,一般这个域值(threshold)是以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号(basel

在PCR反应早期,产生荧光的水平不能与背景明显地区别,而后荧光的产生进入指数期、线性期和终的平台期,因此可以在PCR反应处于指数期的某一点上来检测PCR产物的量,并且由此来推断模板初的含量。为了便于对所检测样本进行比较,在real-timeQ-PCR反应的指数期,**需设定一定荧光信号的域值,一般这个域值(threshold)是以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号(baseline),荧光域值的缺省设置是3~15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。

升降速率

热力块的升降速率也将影响反应的效率。这是PCR循环各阶段之间温度变化的速度。

与老式仪器相比,现代PCR扩增仪的升温速度往往更快。较新的仪器具有更快的整体循环时间和更快的升降速率,这意味着反应混合物在变性、退火和延伸步骤之间的温度时间更短。

一些现代PCR扩增仪可以通过其软件中的特定算法进行编程,以旧机器的升降速率。如果一个PCR方案是用旧机器开发和优化的,然后转移到较新的仪器上,这就特别有用。

PCR机器还包括计算反应混合物达到编程温度所需时间的算法,即所需的升降速率。为了使其准确,在PCR扩增仪上进行PCR循环编程时,必须包括反应体积。如果使用的反应体积大于所述,那么机器将错误地认为样品在实际达到所需温度之前就已经达到了。

引物退火

在PCR循环过程中,PCR扩增仪,控制引物退火步骤的温度是很重要的。如果温度太高,引物退火的效率会降低。太低,它的特异性就会降低,这可能导致非特异性产物的扩增,降低你的PCR的整体效率。

为了确定退火步骤的温度,荧光pcr仪,可以建立重复的PCR反应,pcr仪,每个反应使用不同的退火温度进行测试。

另外,也可以使用带有梯度块的PCR扩增仪。梯度区块允许在整个区块内同时使用一系列的温度,这意味着可以同时评估多个退火温度。一些PCR扩增仪配备了分段式温度块,而不是一体式温度块,这允许同时使用更大范围的温度。

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